АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ВО ВКУСОВЫХ КЛЕТКАХ.

Проводился анализ экспрессии генов во вкусовой ткани, кодирующих ряд рецепторов, G-белков, эффекторных ферментов и ионных каналов, с использованием метода RT-PCR и ген-специфичных праймеров. В ряде случаев экспрессия  подтверждена на уровне белка методами иммуногистохимии. Долгосрочной целью данных экспериментов является установление корреляции между функциональными свойствами клеток и типами сигнальных белков, экспрессируемых ими. Поскольку вкусовая ткань гетерогенна, то транскрипты, идентифицированные на уровне тотальных препаратов, невозможно однозначно приписать какой-либо из четырех клеточных линий, функционирующих во вкусовой почке. В связи с этим, отработана методика анализа экспрессии генов в одиночных идентифицированных клетках. С этой целью одиночная клетка характеризовалась электрофизиологически методом patch clamp, затем затягивалась в кончик регистрирующего электрода, содержимое которого затем выдавливалось в пробирку. Клеточный материал от 1-10 клеток собирался в одной пробирке для дальнейшего анализа с использованием методов RNA амплификации и PCR с ген-специфичными праймерами. Используя данный подход, в частности показано, что вкусовые клетки типа II экспрессируют канальные белки TRPM5, Cx36, Cx30.1, Cx33, Cx43 и Px1 (Рис.1).