АТФ-БИОСЕНСОР.

Аденозин трифосфат (ATФ) используется центральной и периферической нервными системами в качестве нейротрансмиттера/нейромодулятора. Чтобы исследовать механизмы секреции ATФ одиночными клетками мы разработали метод для мониторинга нуклеотида во внеклеточном пространстве, основанный на регистрации активности клеток, способных отвечать на экстраклеточный ATФ. Использовались клетки линий НЕК-293 и COS-1, экспрессирующие эндогенные P2Y рецепторы, а также клетки линии HEK-293, трансфецированые кДНК, кодирующей P2X3-рецептор. По большинству показателей (порог чувствительности, время инактивации ATФ-ответа, рефрактерный период) клетки линии оказались COS-1 наиболее удобны для использования в качестве АТФ-сенсоров.. Клетки COS-1 генерируют ответы АТФ преимущественно за счет высвобождения депонированного Са2+. Последнее позволяет регистрировать активность исследуемых клеток электрофизиологическими методами и одновременно отслеживать их ATP секрецию по Са2+ ответам клеток COS-1. Данный методический прием, позволяет изучать секрецию в принципе любых сигнальных молекул, на которые существуют рецепторы, сопряженные с мобилизацией внутриклеточного Са2+.